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轉(zhuǎn)氫酶2測(cè)試盒

簡(jiǎn)要描述:轉(zhuǎn)氫酶2測(cè)試盒 線粒體轉(zhuǎn)氫酶-2(TH-2)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-05-08
  • 訪  問  量:293

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

轉(zhuǎn)氫酶2測(cè)試盒

微量法 100管/96樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為線粒體復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

測(cè)定原理

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,測(cè)定375nm光吸收的增加速率,來計(jì)算TH-2活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:液體100mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體50mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體18mL×1瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1支,-20℃保存;

試劑五:粉劑×1支,-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

  • 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

  • 將勻漿600g,4℃離心5min。

  • 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

  • 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的TH-2(此步可選做)。

  • 步驟④中的沉淀即為線粒體,加入500uL試劑二,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于TH-2活性測(cè)定。

測(cè)定步驟:

  1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至375nm,蒸餾水調(diào)零。

  2. 樣本測(cè)定

(1)工作液的配制:臨用前將試劑四、五轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL工作液,混勻,立即記錄375nm處初始吸光值A(chǔ)1和 10min后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

TH-2活性計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個(gè)酶活性單位。

 TH-2活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T=149×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個(gè)酶活性單位。

TH-2活性(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=74.5×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個(gè)酶活性單位。

TH-2活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.149×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:APADH摩爾消光系數(shù),6.7×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,0.5mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個(gè)酶活性單位。

 TH-2活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T=298×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個(gè)酶活性單位。

TH-2活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=149×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個(gè)酶活性單位。

TH-2活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.298×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:APADH摩爾消光系數(shù),6.7×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,0.5mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

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  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

轉(zhuǎn)氫酶2測(cè)試盒

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